抗坏血酸L/D异构体分析难点解析及解决方案
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时间 2025-08-21

(图片来源:baotu)


抗坏血酸又名L(+)抗坏血酸(分子式:C6H8O6),即大家熟悉的维生素C,由于其参与机体复杂的代谢过程,能促进生长和增强对疾病的抵抗力,广泛用于食品中的营养增补剂、抗氧化剂,以及小麦粉改良剂等。

而异抗坏血酸即D(-)抗坏血酸是抗坏血酸的一种立体异构,化学性质相似,具有强抗氧化性,常被用作食品中的抗氧化剂,因此在食品检测中需要完全分离二者以准确测定抗坏血酸含量。


目前分析方法是依据《GB5009.86 食品中抗坏血酸的测定》中第一法高效液相色谱法测定L(+)抗坏血酸及D(-)抗坏血酸。

该检测方法普遍反馈非常难做,出现峰形前延、保留时间漂移,容易造成分离度下降等问题,且色谱柱寿命较短(仅1个月),极大的影响了抗坏血酸检测的准确度和稳定性。

难点解析:

L(+)抗坏血酸和D(-)抗坏血酸的极性较大,在普通C18柱上保留较弱,同时它们属于光学异构体,不易分离。因此国标方法中采用流动相中加入离子对试剂,通过离子交换力来增加酸性样品的保留。

但离子对试剂流动相需要平衡的时间非常长,才能达到较好的分离度和峰形(有客户反馈需要平衡10小时以上)。另外离子对试剂从色谱柱中难以洗脱,会对色谱柱填料产生改性,导致后续检测中出现保留时间漂移、分离度下降,峰形变差等现象。


那么,一切问题的罪魁祸首就是这个离子对试剂了呗?

“离子对试剂”却说:样品特性决定了我必须出场!


(图片来源:soogif)


根据以上分析,月旭科技尝试不使用离子对试剂,通过一种“特殊的C18柱”——Ultimate® Plus LP-C18色谱柱来分析L(+)抗坏血酸及D(-)抗坏血酸。

● 这款色谱柱填料生产过程中采用不封尾设计,本身对极性化合物的保留较强;

● LP-C18填料结构同时存在多重作用力相互作用,在既往的很多实验中我们发现其对于同分异构体、手性异构体的分离有着独特的表现;

● 另外,月旭Plus系列色谱柱抗污染力强,比较稳定,更适合食品检测这种基质复杂的情况。


经测试,Plus LP-C18色谱柱用于分析L(+)抗坏血酸及D(-)抗坏血酸,峰形、分离度均良好,操作简便,重现性好。


(图片来源:soogif)


解决方案

色谱条件:

色谱柱:Ultimate® Plus LP-C18(4.6*250mm*5μm)。

流动相:参照原国标(不加离子对试剂);

流  速:0.7mL/min;

进样量:20μL;

柱  温:25℃;

检测器:UV;

检测波长:245nm;

洗脱时间:15min。

分析结果:


该方法流动相体系简单,抗坏血酸与异抗坏血酸完全分离,且保留时间稳定,连续多针进样后分离度保持不变,完全符合日常抗坏血酸的检测要求。